作者：孫曉博，金描真，李雪，金鴿
;【關(guān)鍵詞】; 龍血竭；龍血素A；龍血素B；高效液相色譜法；組織分布
Abstract:Objective To study the tissue distribution of loureirin A and loureirin B in rats.Methods After intragastric (i.g.) administration of loureirin A and loureirin B at doses of 250 mg/100 g in rats, the tissue concentrations at different time points were determined by HPLC．Results After i.g. administration, the main tissue distributions of loureirin A and loureirin B in rats were similar. The loureirin A and loureirin B concentrations in the liver and kidney were the highest and those in the spleen，heart，lung，brain， and muscle decreased sequentially．Conclusion There was an extensive distribution of loureirin A and loureirin B in rats．
Key words:Dracaena cochinchinensis (Lour) S.C.Chen; loureirin A；loureirin B； HPLC；tissue distribution；
血竭(Dragon′s blood) 又名麒麟竭,為傳統(tǒng)名貴中藥。國(guó)產(chǎn)血竭稱龍血竭, 龍血竭具有活血、化瘀、止血、補(bǔ)血的功效,被譽(yù)為“活血圣藥” ［1］,臨床應(yīng)用廣泛。 文獻(xiàn)報(bào)道龍血竭中的主要成分為黃酮類化合物,其在治療冠心病、腦梗死、心肌缺血、腦缺血損傷的保護(hù)作等方面有顯著療效［2,3］。龍血素A、龍血素B是龍血竭黃酮的主要成分，所以本文用HPLC法［4］測(cè)定了龍血素A和龍血素B在不同組織中的濃度，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1; 材料與方法
1.1; 動(dòng)物
;;; SD大鼠，體質(zhì)量（250±20） g，雌雄兼?zhèn)洌芍猩酱髮W(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：2006A064。
1.2; 主要儀器及試劑
;;; Waters高效液相色譜儀：515 HPLC泵，2487雙波長(zhǎng)吸收檢測(cè)器，N2000雙通道色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)；TDL802B臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；超聲儀(上海超聲波儀器廠)；ZH2; BLENDER渦旋混合器(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠)。
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廣西產(chǎn)龍血竭(廣西中醫(yī)學(xué)院制藥廠提供)；龍血素A、龍血素B對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)；乙腈(色譜純)；甲醇(色譜純)，乙酸乙酯，無(wú)水乙醇，冰醋酸等均為分析純。
1.3; 色譜條件
;;; 色譜柱：DIAMonSIL; C18(5 μm，250 mm×4．6 mm)；保護(hù)柱：Easyguard C18 Replacement CartridgesCat#6101；流動(dòng)相：乙腈1％冰醋酸(體積比35∶65)；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；流速：1.2 mL／min，柱溫30 ℃。
1.4; 龍血素A、龍血素B對(duì)照品貯備液的制備
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取龍血素A用甲醇配制成每1 mL含100 μg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。龍血素B用甲醇配制成每1 mL含80 μg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。
1.5; 樣品的制備與測(cè)定
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取大鼠心、肝、脾、肺、腎、腦，用水洗凈，濾紙吸干，稱重，加生理鹽水制成30%的組織勻漿液，-20 ℃保存，備用。
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取組織勻漿液1 mL，加入乙腈2 mL，乙酸乙酯2 mL［4］，渦旋振蕩1 min，3 000 r/min 離心10 min，取上清液，再重復(fù)提取2次，合并上清液，50 ℃水浴揮干，于殘?jiān)屑尤?00 μL甲醇,溶解，10 000 r/min 離心10 min，取上清液20 μL進(jìn)樣。
2; 結(jié); 果
2.1; 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍
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取各組織空白勻漿液，精密加入龍血素A、龍血素B對(duì)照品儲(chǔ)備液，配成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻，按“1.5”項(xiàng)下的方法，自“加入乙腈2 mL，乙酸乙酯2 mL”起，依法操作。記錄峰面積。以質(zhì)量濃度（ρ)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，龍血素A、龍血素B的質(zhì)量濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，龍血素A和龍血素B的檢測(cè)限為0.025 μg/mL和0.023 μg/mL，各組織回歸方程見(jiàn)表1、表2。表1; 各組織中龍血素A的標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)及線性范圍（略）表2; 各組織中龍血素B的標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)及線性范圍（略）
2.2; 回收率試驗(yàn)
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取各組織空白勻漿液，精密加入龍血素A、龍血素B對(duì)照品儲(chǔ)備液，混勻，按“1.5”項(xiàng)下的方法，自“加入乙腈2 mL，乙酸乙酯2 mL”起，依法操作。計(jì)算絕對(duì)回收率，結(jié)果見(jiàn)表3、表4。表3; 各組織中龍血素A的回收率試驗(yàn)（略）表4; 各組織中龍血素B的回收率試驗(yàn)（略）
2.3; 精密度試驗(yàn)
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取各組織空白勻漿液，精密加入龍血素A、龍血素B對(duì)照品儲(chǔ)備液（加入量與回收率項(xiàng)下加入量相同），混勻。按“1.5”項(xiàng)下的方法，自“加入乙腈2 mL，乙酸乙酯2 mL”起，依法操作。計(jì)算日內(nèi)、日間精密度，各組織中龍血素A和龍血素B的日內(nèi)及日間RSD均小于10%。
2.4; 穩(wěn)定性試驗(yàn)
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取各組織空白勻漿液，精密加入龍血素A、龍血素B對(duì)照品儲(chǔ)備液（加入量與回收率項(xiàng)下加入量相同），混勻。放置-20 ℃保存1周，37 ℃水浴解凍后，按“1.5”項(xiàng)下的方法，自“加入乙腈2 mL，乙酸乙酯2 mL”起，依法操作。凍融樣品穩(wěn)定。
2.5; 方法專屬性
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取2只大鼠，實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水，1只做空白對(duì)照，1只按100 g給予龍血竭250 mg，灌胃給藥，給藥2 h后處死，按“1.5”項(xiàng)下的方法，依法操作。由圖1可見(jiàn)組織中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾龍血素A和龍血素B的測(cè)定。其他組織的HPLC圖中龍血素A和龍血素B的出峰時(shí)間與肝臟的HPLC圖相同。
2.5; 組織分布
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取大鼠36只（實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水）隨機(jī)分成6組，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只，稱重，按100 g大鼠給予龍血竭250 mg，灌胃給藥，分別于1、2、3、4、6、10 h處死大鼠，按“1.5”項(xiàng)下的方法，依法操作。結(jié)果表明，龍血素A、B在肝臟及腎臟濃度最高，然后依次是肺、脾、心、骨骼肌、腦,見(jiàn)圖2、圖3。
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3; 討; 論
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藥物的組織分布與藥物本身的理化性質(zhì)，藥物與組織的親和力及各組織器官的血流量等有密切的關(guān)系，因而在組織中的分布不相同。大鼠口服龍血竭后，經(jīng)血液循環(huán)而不同程度地分布于心、肝、脾、肺、腎、腦等組織中，在外周組織分布較少，這與文獻(xiàn)［2，3］報(bào)道龍血竭中的主要成分為黃酮類化合物,其在治療冠心病、腦梗死、心肌缺血、腦缺血損傷的保護(hù)作等方面有顯著療效相吻合。
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