肉蓯蓉多糖的免疫調(diào)節(jié)活性及吸收特性研究
【摘要】： 目的通過考察肉蓯蓉多糖(polysaccharides of Cistanche deserticola CDPS)對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖及巨噬細(xì)胞活化的作用,研究肉蓯蓉多糖的免疫調(diào)節(jié)藥理學(xué)活性,并通過不同角度和層次對其吸收特性進(jìn)行研究。 方法MTT法檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖。環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide CTX)復(fù)制免疫功能低下的動物模型,分別測定正常及免疫低下動物脾臟、胸腺指數(shù)。胸腺細(xì)胞增殖法測定白細(xì)胞介素-2(IL-2)活性。 采用中性紅法測定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性;Griess試劑法測定NO釋放量;L929細(xì)胞法及小鼠胸腺細(xì)胞法測定TNF-α及IL-1釋放。碳粒廓清法測定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能。 在建立的Caco-2單層細(xì)胞模型上通過測定每孔電阻值(R_(true tissue),比較膜兩側(cè)堿性磷酸酶(ALP)活性,確定Caco-2細(xì)胞單層的可靠性。測定CDPS經(jīng)Caco-2單層細(xì)胞模型A→B 3h轉(zhuǎn)運后受側(cè)濃度,計算其藥效P_(app)值,從體外模型判斷CDPS的吸收特性;經(jīng)體外和體內(nèi)口服給藥藥效比較及口服給藥途徑和腹腔注射給藥途徑藥效的比較從不同角度對肉蓯蓉多糖口服吸收特性進(jìn)行判斷。 結(jié)果CDPS在劑量達(dá)7.8mg/L時可促進(jìn)絲裂原(ConA及LPS)活化淋巴細(xì)胞增殖及IL-2的分泌,對未活化淋巴細(xì)胞劑量需達(dá)25mg/L時加藥組與對照組吸光度值才有顯著性差異。腹腔給藥顯示CDPS(125mg/kg)可明顯提高正常及免疫低下小鼠的脾指數(shù),對因CTX所致胸腺指數(shù)的降低也有顯著地對抗作用。 CDPS在6.25~50mg/L劑量范圍內(nèi)可劑量依賴性地增強(qiáng)BALB/c小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力和促進(jìn)NO釋放;在2.8~100mg/L劑量范圍內(nèi)可使正常和免疫抑制的RAW264.7細(xì)胞NO釋放明顯增加;在0.56~7.2mg/L或3.6~10mg/L范圍促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞TNF-α或IL-1產(chǎn)生,均具有良好的量效關(guān)系。CDPS可在一定程度上提高CTX致免疫功能低下小鼠碳粒廓清指數(shù)K。 R_(true tissue)值在細(xì)胞單層形成過程中穩(wěn)定增長,細(xì)胞模型兩側(cè)培養(yǎng)液中ALP活性差異逐步加大,表明建立的Caco-2細(xì)胞模型在完整性、細(xì)胞極性方面符合藥物吸收特性研究的要求,CDPS過Caco-2細(xì)胞模型求得P_(app)值為9.41×10~(-8)cm/s＜10×10~(-6)cm/s;對于相同或相關(guān)藥效指標(biāo),CDPS顯示出體外及腹腔給藥有效,而口服(體內(nèi))無效的特征。 結(jié)論CDPS明顯促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖,提高正常及免疫抑制小鼠的脾指數(shù),該作用可能與其促IL-2分泌有關(guān)。CDPS可顯著提高巨噬細(xì)胞吞噬及分泌功能,活化巨噬細(xì)胞。顯示CDPS是肉蓯蓉免疫調(diào)節(jié)的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。但口服吸收不良,因此臨床應(yīng)綜合權(quán)衡,選擇適合的給藥方式,以達(dá)最佳療效。
【關(guān)鍵詞】：肉蓯蓉多糖 淋巴細(xì)胞增殖 巨噬細(xì)胞活化 口服吸收 Caco-2 細(xì)胞模型
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R285.5
【DOI】：CNKI:CDMD:2.2010.015582
《中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》 2009年
