目的:探討從滇重樓莖葉中提取的化學(xué)結(jié)構(gòu)明確的滇重樓莖葉皂甙Ⅱ(DRGⅡ)誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制。方法:采用倒置相差顯微鏡、熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化:流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期與凋亡及磷脂酰絲氨酸(PS)轉(zhuǎn)位;免疫組織化學(xué)法分析DRGⅡ?qū)562細(xì)胞Bcl-2、Bax、Fas蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:①5ug/mlDRGⅡ處理K562、HL60細(xì)胞24h時,細(xì)胞出現(xiàn)大小不等,形狀不規(guī)整,胞核分裂固縮,染色質(zhì)濃集等形態(tài)特征。②5ug/mlDRGⅡ分別處理K562、HL60細(xì)胞24h、48h及72h時均出現(xiàn)亞二倍體峰,并隨作用時間的延長而增加。K562細(xì)胞出現(xiàn)G2/M期阻滯,HL60細(xì)胞出現(xiàn)S期阻滯。③5ug/mlDRGⅡ處理K562細(xì)胞24h時,11.2%的細(xì)胞出現(xiàn)PS轉(zhuǎn)位,陽性對照組僅3.55%。④免疫組織化學(xué)染色表明處理組K562細(xì)胞低表達(dá)Bcl-2蛋白,Bax蛋白無明顯變化,F(xiàn)as蛋白表達(dá)較對照組無明顯上升。結(jié)論:DRGⅡ可誘導(dǎo)K562、HL60細(xì)胞凋亡,誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能與Bcl-2蛋白低表達(dá)有關(guān)。 |
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