【摘要】：肉蓯蓉(Cistanche deserticols Ma)為列當科肉蓯蓉屬植物。其主要活性成分為苯乙醇甙類化合物。為解決肉蓯蓉資源匱乏,滿足人們需求,本文開展了利用肉蓯蓉細胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)苯乙醇甙類化合物的可行性研究,以及對肉蓯蓉懸浮培養(yǎng)體系中苯乙醇甙合成的調(diào)控研究,并對肉蓯蓉毛狀根的培養(yǎng)進行了初步研究。 利用細胞團克隆法篩選出穩(wěn)定的肉蓯蓉高產(chǎn)愈傷組織,培養(yǎng)基配方為B5+CH(500mg/L)+IAA(2 mg/L)+BA(1 mg/L),生長周期為25d,干重達到13.2g/L,其苯乙醇甙含量達到干重的12.9%。HPLC 檢測結(jié)果表明其苯乙醇甙類化合物各成分與野生中一致,均有所提高。 建立了肉蓯蓉細胞懸浮培養(yǎng)體系,培養(yǎng)基配方為MS+GA3 (10mg/L)+BA(0.5mg/L) +CH( 800 mg/L),生長周期為36d,生長曲線呈“S 型”。干重達到15.4g/L,其苯乙醇甙含量達到干重的2.4%,與野生中含量幾乎相等。HPLC 檢測結(jié)果表明其主要成分較野生肉蓯蓉復雜。 兩種非生物誘導子茉莉酸甲酯和水楊酸都能誘導肉蓯蓉懸浮培養(yǎng)細胞苯乙醇甙的生物合成。誘導子的作用效果與誘導子的濃度和添加時間有關(guān)。與未經(jīng)誘導子處理的細胞培養(yǎng)結(jié)果相比,MJ 在對數(shù)生長初期(培養(yǎng)14d),添加濃度為5μmol/L 條件下,對細胞干重無抑制作用,可使肉蓯蓉懸浮細胞系中PeG 含量提高2.59 倍;而SA 在對數(shù)生長后期(培養(yǎng)28d),添加濃度為50μmol/L 條件下,對細胞干重有抑制作用,但可使PeG含量提高2.71 倍。經(jīng)兩種誘導子處理的肉蓯蓉細胞中,PAL 酶活性均明顯增強。 利用發(fā)根農(nóng)桿菌感染肉蓯蓉愈傷組織,誘導出了毛狀根,但其誘導率低,且生長慢,無分支。PCR 檢測結(jié)果表明,此毛狀根是由TL-DNA 轉(zhuǎn)化所產(chǎn)生。本試驗表明,利用毛狀根技術(shù)生產(chǎn)肉蓯蓉中苯乙醇甙類化合物,還需進一步探討。
【關(guān)鍵詞】：肉蓯蓉苯乙醇甙植物細胞培養(yǎng)誘導子毛狀根
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：S567.239
【DOI】：CNKI:CDMD:2.2005.111624
